猫眼豆又称“熊猫豆”,食品是添加酮类一年生豆科植物。猫眼豆是剂对我国河西走廊的珍稀名贵彩色豆种。猫眼豆的猫眼形状和口感独特,营养丰富,豆黄的影易熟,化合活性具有很高的物抗经济价值。黄酮类化合物广泛分布于蔬菜、氧化水果等多种植物中。食品黄酮类化合物不仅在植物的添加酮类生长发育中起着重要作用,而且还具有抗菌、剂对抗病毒、猫眼抗肿瘤、豆黄的影抗氧化、化合活性抗炎、物抗抗衰老、抗心脑血管疾病等多种生物活性。在食品的生产、加工、制备、处理、包装、运输或存贮过程中,为改善食品的色、香、味、防腐、保鲜和加工工艺,需要加入食品添加剂。食品添加剂对食品中天然黄酮类化合物的影响少有报道。本文以猫眼豆为原料,提取猫眼豆中的黄酮类化合物,研究防腐剂、凝固剂、酸味剂、调味剂等常用食品添加剂对猫眼豆黄酮类化合物抗氧化活性的影响,为猫眼豆的加工和应用提供理论依据。
一、材料与方法
1、实验材料
(1)猫眼豆
呼和浩特东瓦窑农贸市场。
(2)主要试剂
芦丁、亚硝酸钠、硝酸铝、DPPH(1,1-dipheny1-2-picrylhydrazy)、乙醇、氢氧化钠、硫酸钙、氯化钙、氯化镁、苯甲酸、山梨酸、丙酸钠、乙酸、柠檬酸、乳酸、谷氨酸钠、蔗糖、氯化钠:均为分析纯。
(3)主要仪器设备
旋转蒸发仪,上海亚荣生化仪器厂;T6新悦可见分光光度计北京普析通用仪器有限责任公司;HH-S数显恒温水浴锅金坛市医疗仪器厂。
2、实验方法
(1)提取猫眼豆中的黄酮类化合物
设计三因素三水平的正交实验,见表1。在不同的乙醇浓度、料液比和温度条件下,提取猫眼豆中的黄酮类化合物,浸提2次,每次6h,选出最优的提取条件。
(2)测定猫眼豆黄酮类化合物的含量
①标准曲线的制作
参照参考文献配制标准溶液,然后在波长500nm处测定吸光度,得到吸光度(Y)与浓度(X,g/L)的线性回归方程:Y=4.4865X一0.0005,相关系数R2=0.9976。
②猫眼豆黄酮类化合物的含量
以正交实验得出的最优提取条件为60%乙醇,料液比1∶25,温度20℃,精确称量猫眼豆,浸提2次,每次6h,合并2次滤液,旋转蒸发至约5mL,然后定容于50mL容量瓶中,分别取1,2mL,与芦丁标准溶液同法显色,测定500nm处的吸光度,计算猫眼豆黄酮类化合物的平均百分含量。
(3)抗氧化活性的测定
采用DPPH法测定猫眼豆黄酮类化合物的抗氧化活性。DPPH是一种稳定的自由基,在517nm处有最大吸收峰。当具有抗氧化作用的黄酮类化合物添加到DPPH溶液中时,自由基减少,吸光度减少,可通过吸光度的减少来判定清除自由基的能力。清除自由基的能力越强,抗氧化的效果越好。用抑制率(K,%)来表示猫眼豆黄酮类化合物的抗氧化活性,抑制率越大,抗氧化性越强。溶液的配制、测定及抑制率的计算参考文献。
K(%)=[1一(Ai一Aj)/Ac]×100%。
(4)防腐剂对猫眼豆黄酮类化合物抗氧化活性的影响
将浓度为2mg/mL的丙酸钠、苯甲酸钠、山梨酸各1mL分别加入到20mL0.01%的猫眼豆黄酮类化合物溶液中,以0.01%的猫眼豆黄酮类化合物做对照,放置5h。用DPPH法在517nm处测定其吸光度,计算添加不同防腐剂后的抑制率。
(5)酸味剂对猫眼豆黄酮类化合物抗氧化活性的影响
取浓度为2mg/mL的乙酸、柠檬酸、乳酸各1mL分别加入到20mL0.01%的猫眼豆黄酮类化合物溶液中,以0.01%的猫眼豆黄酮类化合物做对照,放置5h。用DPPH法在517nm处测定其吸光度,计算添加不同酸味剂后的抑制率。
(6)凝固剂对猫眼豆黄酮类化合物抗氧化活性的影响
将浓度为2mg/mL的硫酸钙、氯化钙、氯化镁各1mL分别加入到20mL0.01%的猫眼豆黄酮类化合物溶液中,以0.01%的猫眼豆黄酮类化合物做对照,放置5h。用DPPH法,在517nm处测定其吸光度,计算添加不同凝固剂后的抑制率。
(7)调味剂对猫眼豆黄酮类化合物抗氧化活性的影响
将浓度为2mg/mL的谷氨酸钠、蔗糖、氯化钠各1mL分别加入到20mL0.0l%的猫眼豆黄酮类化合物溶液中,以0.01%的猫眼豆黄酮类化合物做对照,放置5h。用DPPH法在517nm处测定其吸光度,计算添加不同调味剂后的抑制率。
二、结果与分析
1、猫眼豆黄酮类化合物的提取条件
正交实验提取猫眼豆中黄酮类化合物的结果见表2。猫眼豆黄酮类化合物提取因素的影响顺序是:料液比>乙醇浓度>温度。猫眼豆黄酮类化合物提取的最优水平是:料液比为1∶25(g/mL),60%乙醇,提取温度为20℃。以此为条件,提取猫眼豆黄酮类化合物,平均提取率为1.196%。
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