收集液使用旋转蒸发仪浓缩至尽干,种天中种氮气吹干,然植用2mL 88%乙腈水溶液准确定容,物提超声溶解,取物样品液使用一次性注射器过0.22μm滤膜,多环的装小瓶进样检测。芳烃方法
(3)葡萄籽提取物和绿咖啡豆提取物
精确称取0.3~0.59样品(精确至0.00019)于10mL试管中,测定依次加入3mL超纯水和0.5mL色谱纯乙醇溶液,种天中种涡旋、然植超声使其溶解,物提再加入2mL色谱纯正己烷,取物涡旋混匀。多环的在4000r/min、芳烃方法15℃条件下离心5min。测定
绿咖啡豆提取物用移液枪将上层正己烷转移至圆底烧瓶中,种天中种葡萄籽提取物用60℃~80℃水浴加热溶液,使正己烷层溶解,再用移液枪将上层正己烷转移至圆底烧瓶中,用正己烷重复萃取1次,合并正己烷溶液。氮气将正己烷吹干,用2mL88%乙腈水溶液准确定容,超声溶解,样品液使用一次性注射器过0.22μm滤膜,装小瓶进样检测。
(4)姜黄提取物
精确称取0.4~0.59姜黄素样品(精确至0.000lg)于10mL试管中,用5mL丙酮溶液涡旋提取2min后,用1mL移液枪将上清液转移至100mL圆底烧瓶中,再用5mL丙酮涡旋提取1min,用1mL移液枪将上清液转移至100mL圆底烧瓶中,旋转蒸发仪浓缩至尽干,氮气吹干,3mL正己烷和0.5mL丙酮溶解,样品液待净化。
依次用5mL二氯甲烷、5mL正己烷活化SPE小柱;将待净化液加入SPE小柱,再用2mL正己烷荡洗圆底烧瓶后继续加入;用3mL正己烷淋洗,待淋洗液流完之后继续加人3mL正己烷淋洗;用10mL二氯甲烷洗脱。
收集洗脱液,旋转蒸发仪浓缩至近干,氮气吹干,用2mL 88%乙腈水溶液准确定容,超声溶解,样品液使用一次性注射器过0.22μm滤膜,装小瓶进样检测。
5、标准溶液配制
(1)多环芳烃标准储备液配制
将多环芳烃标准品配制成浓度约为40mg/kg的标准储备液,—20℃冷冻保存,有效期3年。
(2)多环芳烃标准工作溶液配制
通过多次稀释将多环芳烃标准储备液稀释成浓度约为1.6μg/kg的标准工作液,冷藏保存,有效期1年。
6、结果计算
分别检测标准工作液、样品液和空白试样溶液,积分记录峰面积,采用外标单点定量法,计算得到样品中四种多环芳烃的含量,计算结果保留到小数点后两位。
二、结果与分析
1、仪器方法建立和优化
参照《GB 5009.265—2016食品安全国家标准食品中多环芳烃的测定》中液相色谱条件,通过多波长扫描方式确定四种目标成分最大吸收波长,并运行检测多环芳烃标准品溶液和样品溶液,确定色谱分离效果。结果表明:国标方法梯度洗脱程序能满足四种多环芳烃成分分离的要求,但各组分的检测波长未达到最优,因此对四种多环芳烃检测波长进行了优化,最终能够实现在满足分离效果的前提下,提高灵敏度。流动相梯度条件如表1所示时,4种多环芳烃标准溶液色谱图,见图1,标准品成分及保留时间见表2。因此色谱柱
Agilent Eclipse PAH C18(4.6×250mm,5μm);柱温:40℃;检测波长:䓛:激发波长270nm,发射波长385m;苯并(b)荧蒽、苯并(a)蒽、苯并(a)芘:激发波长288nm,发射波长430nm;进样量:100μL;流速:1.5mL/min;运行时间:40min;流动相A:水;流动相B:乙腈。使用表1所示的流动相梯度条件。
2、线性关系,检出限和定量限
按照1.5配制成系列标准工作溶液,按照1.3所述条件进行检测。用分析物峰面积对被测组分的浓度作图,结果见表2。由表2可知,4种多环芳烃在0.0lμg/kg~8.0μg/kg范围内呈良好线性关系,相关系数R2为1.0000。
以3倍和10倍的信噪比(S/N)分别确定了仪器方法的检出限(LODs)和定量限(LOQs),结果列于表3。4种多环芳烃的仪器方法定量限为0.04μg/kg。
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